V8蛋白酶
Cat.No.：66676-43-5
EC：3.4.21.19
全名: 序列分析纯V8蛋白酶；金黄色葡萄球菌V8蛋白酶
别名: V8蛋白酶；谷氨酰胺内切酶；天冬酰胺内切酶
储存条件：冻干粉，2-8℃
来源：基因工程生产，大肠杆菌表达。
1.产品简介
V8蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶家族，能特异水解谷氨酸或天冬氨酸残基羧基侧肽键。在pH 7.8的NH4HCO3和pH 4.0的CH3COONH4缓冲液中识别并切割Glu羧基端肽键，在pH 7.8的磷酸盐缓冲液中识别并切割Glu或Asp羧基端肽键，且对Glu的水解速率高于Asp。V8蛋白酶在pH4.0-10.0之间均有活性，最适pH为8.0-8.5。在进行蛋白质酶切测序、肽图谱分析和肽质量指纹图谱分析中使用时，可以单独使用或与其他蛋白酶混合使用。V8蛋白酶的抑制剂有二异丙基氟磷酸（DFP）、α2- 巨球蛋白和Nα-P-甲苯磺酰基-L-赖氨酸氯甲基酮（TLCK）。
2.产品特性
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来源 |
重组大肠杆菌 |
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产品外观 |
白色、类白色、类黄色粉末 |
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比活 |
≥ 5.0 AU /mg pro. |
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蛋白电泳 |
单一主条带 |
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分子量 |
24.0±2.4 kDa |
单位定义：在25℃，pH7.8的条件下，每分钟催化底物（Z-Phe-Leu-Glu-4-nitranilide）生成1μmol对硝基苯胺（4-nitroaniline）所需要的酶量为一个酶活性单位。
比活性：25°C时，以Z-Phe-Leu-Glu-4-nitranilide为底物测得的活性约为20 U/mg pro.（对应于37°C时，以酪蛋白为底物的活性约为500 U/mg pro）。
3.储存和运输稳定性
储存稳定性：重组V8蛋白酶冻干粉存于2-8℃，24个月稳定；
溶解后稳定性：用水或50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于-20℃ 以下（1mg/ml），6个月稳定；
用水或50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于4℃（1mg/ml，无菌），2个月稳定；
用50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于25℃或37℃（0.5mg/ml）12h，活性可维持85%以上；
溶解后溶液可反复冻融10次无活性损失。
运输稳定性：蓝冰保温运输，活性稳定。
4.推荐使用方法
1）使用前注意
可按使用量分装以限度避免污染或自切。
2）目的蛋白溶解
用酶切buffer溶解目的蛋白，例如25-50mM NH4HCO3 pH7.8，若溶解度不好对目的蛋白变性，添加尿素、SDS、DTT或加热。尿素和SDS对V8蛋白酶的影响见表一。
3）酶切
V8蛋白酶和目的蛋白推荐比例为1/20-1/100（W/W)，25℃或37℃酶切2-18h。
表一：V8蛋白酶在含有不同浓度变性剂，尿素25℃2h，SDS25℃12h的稳定性
（注：V8蛋白酶0.5mg/ml，50mM Tris-HCl pH8.0）
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变性剂 |
浓度 |
残余酶活 |
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不添加 |
0 |
100% |
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尿素 |
2M |
95% |
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5M |
12% |
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8M |
0 |
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SDS |
0.1% |
90% |
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0.5% |
80% |
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1% |
50% |
100 μl胰岛素溶液+198 μl 0.4 M Tris-HCl pH8.0+60 μl 0.1%V8蛋白酶液+超纯水补至400 μl。37 ℃水浴反应2 h，加6 μl磷酸溶液终止反应，C18柱分析：
A：酶切之前 B：酶切之后
5.产品优势
6.相关产品
重组肠激酶；
序列分析纯羧肽酶B；
序列分析纯胰蛋白酶；
序列分析纯糜蛋白酶。
